烟草花叶病毒检测卡（荧光定量/定性）

烟草花叶病毒检测卡（荧光定量/定性）

一、概要

花叶病毒是由蚜虫传播的一种在植物上寄生的病毒。花叶病毒病和坏疽（环斑）花叶病通常在同一植株上作为合并症发生 ，危害十分严重。 花叶病毒病，最初表现为叶片部分或整体萎蔫，呈黄白色斑驳的花叶状，出现皱缩。生长初期感染和发病的植株，生长不良，不结球，损失惨重. 坏疽（环斑）花叶病，在叶脉间形成许多1～3mm的黑褐色水清状斑点或轮斑，叶脉和叶柄上出现紫褐色水渍状坏死条斑。这种症状也出现在叶球内部。有的植株单侧出现病斑，导致叶球扭曲；有的在生长后期感染发病，只在叶球内部的叶片形成病斑。

烟草花叶病毒 tobacco mosaic virus 缩写TMV，为RNA病毒，是烟草花叶病等的病原体，属于Tobamovirus群，是目前烟草生产上分布最广、 发生最为普遍的一类病害 ，对烟草的危害极大。烟草花叶病和番茄花叶病早为一般所了解。叶上出现花叶症状，生长陷于不良状态，叶常呈畸形。

检测卡（试纸条）采用单克隆抗体和荧光定量技术结合，用于快速检测粮食、蔬果、烟草中的花叶病毒，适用于各种单位现场快速检测的需求。检测卡（试纸条）的检测灵敏度可达10000 cfu/g。以求达到早发现，精准施治，为花叶病毒监测及防控提供重要技术支撑。与实验室大型仪器分析技术相比具有快速、简便、低成本等特点, 操作时间仅需15分钟。

二、适用范围

云南佰司特科技有限公司开发的烟草病害定量/定性检测卡（试纸条）是在免疫荧光层析技术上设计并研发出来的，可以在较短时间内完成烟草病害含量的定量/定性分析，具有操作简单方便、灵敏度高、检测范围宽等优势。检测项目包括：

真菌病害（烟草赤星病、烟草黑胫病、烟草根黑腐病、烟草猝倒病、烟草立枯病、烟草白粉病、烟草炭疽病等）；

细菌病害（烟草青枯病、烟草野火病等）；

病毒病害（烟草花叶病毒病、马铃薯Y病毒病、马铃薯X病毒病、烟草坏死病毒病、烟草脉斑驳病毒病等）。

三、技术原理

烟草病害定量/定性检测卡（试纸条）是以硝酸纤维素膜为固相载体，以时间分辨荧光微球作为示踪标记物，在硝酸纤维素膜的层析作用下，荧光标记的抗体与抗原或二抗进行免疫识别并被荧光微球示踪，显示荧光条带，在定量检测仪中读取相对应的定量或定性结果。

四、准备工作

检测卡（试纸条）、5ml离心管（内含提取液）、捣棒、吸管、干燥剂

荧光定量检测仪

五、操作步骤

（1）从原包装袋中取出所需数目的检测卡（试纸条），打开后请在一个小时内尽快使用。

（2）取适量的烟叶（0.5g±0.02g）、烟苗或者苗圃用水放入5 ml离心管中。

（3）将烟叶放入含有提取液的5mL离心管中，使用捣棒上下捣10-15次捣碎，静置分层。

（4）移液器取捣碎的样本溶液100ul（滴管3-4滴）垂直滴于检测卡（试纸条）的加样孔（试纸条上小孔）中。

（5）液体流动时开开始计时，反应10min，判读结果。

六、定性判断

阴性（-）：C线处显红色，T线处不显，表示样本中烟草花叶病毒含量低于检测限。

阳性（+）：C线和T线处同时显红色，表示样本中烟草花叶病毒含量等于或者高于检测限。

无效：    C线处未显红色，表明不正确的操作过程或试纸条已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡（试纸条）重新测试。

七、定量检测

（1）将荧光定量检测仪开机。

（2）将检测卡（试纸条）插入样品孔，然后开始测定。

（3）获得样品中烟草花叶病毒数量，输出结果。