烟草花叶病毒检测卡(荧光定量/定性)
一、概要
花叶病毒是由蚜虫传播的一种在植物上寄生的病毒。花叶病毒病和坏疽(环斑)花叶病通常在同一植株上作为合并症发生 ,危害十分严重。 花叶病毒病,最初表现为叶片部分或整体萎蔫,呈黄白色斑驳的花叶状,出现皱缩。生长初期感染和发病的植株,生长不良,不结球,损失惨重. 坏疽(环斑)花叶病,在叶脉间形成许多1~3mm的黑褐色水清状斑点或轮斑,叶脉和叶柄上出现紫褐色水渍状坏死条斑。这种症状也出现在叶球内部。有的植株单侧出现病斑,导致叶球扭曲;有的在生长后期感染发病,只在叶球内部的叶片形成病斑。
烟草花叶病毒 tobacco mosaic virus 缩写TMV,为RNA病毒,是烟草花叶病等的病原体,属于Tobamovirus群,是目前烟草生产上分布最广、 发生最为普遍的一类病害 ,对烟草的危害极大。烟草花叶病和番茄花叶病早为一般所了解。叶上出现花叶症状,生长陷于不良状态,叶常呈畸形。
本试剂盒采用单克隆抗体和荧光定量技术结合,用于快速检测粮食、蔬果、烟草中的花叶病毒,适用于各种单位现场快速检测的需求。用于试纸条的检测灵敏度可达10000 cfu/g。以求达到早发现,精准施治,为花叶病毒监测及防控提供重要技术支撑。与实验室大型仪器分析技术相比具有快速、简便、低成本等特点, 操作时间仅需15分钟。
二、适用范围
云南佰司特科技有限公司开发的烟草病害定量/定性检测卡(试纸条)是在免疫荧光层析技术上设计并研发出来的,可以在较短时间内完成烟草病害含量的定量/定性分析,具有操作简单方便、灵敏度高、检测范围宽等优势。检测项目包括:
真菌病害(烟草赤星病、烟草黑胫病、烟草根黑腐病、烟草猝倒病、烟草立枯病、烟草白粉病、烟草炭疽病等);
细菌病害(烟草青枯病、烟草野火病等);
病毒病害(烟草花叶病毒病、马铃薯Y病毒病、马铃薯X病毒病、烟草坏死病毒病、烟草脉斑驳病毒病等)。
三、技术原理
烟草病害定量/定性检测卡(试纸条)是以硝酸纤维素膜为固相载体,以时间分辨荧光微球作为示踪标记物,在硝酸纤维素膜的层析作用下,荧光标记的抗体与抗原或二抗进行免疫识别并被荧光微球示踪,显示荧光条带,在定量检测仪中或紫外线手电筒读取相对应的定量或定性结果。
四、准备工作
试纸条、1.5ml离心管(内含0.5ml缓冲液)、捣棒、吸管、干燥剂
荧光定量检测仪
或
紫外线手电筒(波长365nm)
五、操作步骤
(1)从原包装袋中取出所需数目的试纸条,打开后请在一个小时内尽快使用。
(2)取烟草脚叶叶柄基部约1-1.5cm左右的样本,加入到含有缓冲液的1.5ml离心管中,使用捣棒上下捣10-15次捣碎烟草样本。
(3)用移液器取捣碎的样本提取液上清70ul(滴管2-3滴),垂直滴于加样孔中。
(4)开始计时,反应10min,判读结果。
六、定性判断
将紫外线手电筒(波长365nm)打开,照射试纸条T处和C处,观察荧光条带。
阴性(-):C线处显红色荧光,T线处不显,表示组织样本中烟草花叶病毒数量低于检测限。
阳性(+):C线和T线处同时显红色荧光,表示组织样本中烟草花叶病毒数量等于或者高于检测限。
无效: C线处未显红色荧光,表明不正确的操作过程或试纸条已失效。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试纸条重新测试。
七、定量检测
(1)将荧光定量检测仪开机。
(2)将试纸条插入样品孔,然后开始测定。
(3)获得样品中烟草花叶病毒数量,输出结果。