烟草花叶病毒检测卡（荧光定量）

一、概要

花叶病毒是由蚜虫传播的一种在植物上寄生的病毒。花叶病毒病和坏疽（环斑）花叶病通常在同一植株上作为合并症发生 ，危害十分严重。 花叶病毒病，最初表现为叶片部分或整体萎蔫，呈黄白色斑驳的花叶状，出现皱缩。生长初期感染和发病的植株，生长不良，不结球，损失惨重. 坏疽（环斑）花叶病，在叶脉间形成许多1～3mm的黑褐色水清状斑点或轮斑，叶脉和叶柄上出现紫褐色水渍状坏死条斑。这种症状也出现在叶球内部。有的植株单侧出现病斑，导致叶球扭曲；有的在生长后期感染发病，只在叶球内部的叶片形成病斑。

烟草花叶病毒 tobacco mosaic virus 缩写TMV，为RNA病毒，是烟草花叶病等的病原体，属于Tobamovirus群，是目前烟草生产上分布最广、 发生最为普遍的一类病害 ，对烟草的危害极大。烟草花叶病和番茄花叶病早为一般所了解。叶上出现花叶症状，生长陷于不良状态，叶常呈畸形。

本试剂盒采用单克隆抗体和荧光定量技术结合，用于快速检测粮食、蔬果、烟草中的花叶病毒，适用于各种单位现场快速检测的需求。用于试纸条的检测灵敏度可达10000 cfu/g。以求达到早发现，精准施治，为青枯病监测及防控提供重要技术支撑。与仪器分析技术相比具有快速、简便、低成本等特点, 操作时间仅需15分钟。

二、适用范围

可定性、定量检测烟叶样本花叶病毒数量。

三、试剂盒构成

    试纸条、1.5ml离心管（内含0.5ml缓冲液）、捣棒、吸管、干燥剂

四、使用单位需自备的设备

      手持式青枯病菌数量荧光检测仪

      或

      紫外线手电筒（波长365nm）

五、操作步骤

（1）从原包装袋中取出所需数目的试纸条，打开后请在一个小时内尽快使用。

（2）取烟草脚叶叶柄基部约1-1.5cm左右的样本至含有缓冲液的1.5ml离心管中，使用捣棒上下捣10-15次捣碎。

（3）用移液器取捣碎的样本溶液70ul（滴管2-3滴）垂直滴于加样孔中。

（4）液体流动时开始计时，反应10min，判读结果。

六、定性判断

   将紫外线手电筒（波长365nm）打开，照射试纸条T处和C处，观察荧光条带。

阴性（-）：C线处显红色荧光，T线处不显，表示组织样本中青枯病菌数量低于检测限。

阳性（+）：C线和T线处同时显红色荧光，表示组织样本中青枯病菌数量等于或者高于检测限。

无效：    C线处未显红色荧光，表明不正确的操作过程或试纸条已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条重新测试。

   样品中花叶病毒数量检测定性结果显示

七、定量检测

（1）将手持式花叶病毒数量荧光检测仪开机。

（2）将试纸条插入样品孔，然后按测定。

（3）获得样品中花叶病毒数量，输出结果。